摘　要：目的　探讨CD34抗原检测应用于骨髓增生异常综合征(MDS)患者的诊断及疗效观察。方法　对316例MDS患者检测骨髓形态学的同时，利用流式细胞仪同步检测CD34抗原。结果　在MDS各亚型中CD34阳性细胞与骨髓形态学原始细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。以骨髓形态学检测结果为标准，CD34抗原检测结果与其相同者为符合，316例患者中，CD34抗原检测有244例与骨髓形态学检测结果符合，总符合率77.21%。结论　CD34抗原检测应用于MDS患者的诊断及疗效观察，是对骨髓形态学检测的补充，使MDS患者的诊断结果更准确可靠。

　　关键词：骨髓增生异常综合征;流式细胞仪; CD34抗原;骨髓形态学

　　骨髓增生异常综合征(myelodysplastic　syndrome，MDS)表现为血细胞减少。外周血和骨髓中原始细胞数，以及病态造血现象是MDS分型的重要参考指标，根据原始细胞数的多少分为低危型MDS及高危型MDS。近年来，免疫分型技术广泛应用于血液病诊断、治疗与疗效观察。CD34是临床应用较多的一种抗原，越是早期的造血细胞，CD34分化抗原表达越高。CD34抗原在MDS各亚型诊断及观察疾病的进展中起着重要作用，是对形态学分型的补充。本院对MDS患者进行骨髓形态学检查的同时，利用流式细胞仪同步检测CD34抗原，使MDS患者的诊断结果更加准确可靠，对MDS的治疗及预后判断具有指导意义。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料　选择本院2006年1月至2012年12月住院及门诊的MDS患者316例，男性195例，女性121例;年龄6～87岁，平均(45.85±15.08)岁。其中，难治性贫血(RA)119例，难治性贫血伴有环形铁粒幼细胞(RAS)9例，难治性血细胞减少伴有多系发育异常(RCMD)75例，难治性血细胞减少伴多系发育异常和环形铁粒幼细胞(RCMD-RS)5例，难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅰ(RAEB-Ⅰ)63例，难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅱ(RAEB-Ⅱ)33例，急性髓系白血病(AML)12例。12例AML患者中，7例为急性粒细胞白血病部分分化型(AML-M2)，1例为急性粒细胞单核细胞白血病(AML-M4)，3例为急性单核细胞白血病(AML-M5)，1例为红白血病(AML-M6)。

　　1.2　仪器与试剂　Epics　XL流式细胞仪为美国贝克曼公司产品，PE标记的鼠抗人CD34单抗购自美国贝克曼公司。

　　1.3　方法

　　1.3.1　白细胞悬液制备　抽取乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝的骨髓液2mL，用磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞浓度至每升悬液(4～10)×109个白细胞，标记2个试管，一管加入CD45-PC5/lg(对照管)，另一管加入CD45-PC5/CD34-PE(CD45加入5μL，CD34加入10μL)。每管加入稀释后骨髓液50μL，室温避光30min，加入Optilyse　C溶血素500μL，37℃水浴8min，透亮后加入500μL　PBS上机检测。

　　1.3.2　骨髓及外周血细胞形态学观察　骨髓涂片、外周血涂片经瑞-吉染色后，在光学显微镜下，骨髓涂片计数200个有核细胞，观察各系血细胞形态学改变，计数全片巨核细胞总数，并对巨核细胞进行分类，求各型巨核细胞的百分率。血涂片计数100个白细胞，并观察血细胞形态学改变。

　　1.3.3　组织细胞化学染色　选择骨髓小粒丰富的骨髓涂片，进行铁染色，观察骨髓中细胞内铁及细胞外铁的水平。细胞内铁检测：用油镜计数100个中晚期幼红细胞，计算细胞质中含有蓝色颗粒的铁粒幼细胞的百分率，并计数有无环形铁粒幼细胞(围绕细胞核1/2以上的区域有铁粒环绕)，环形铁粒幼细胞大于15%为阳性标准。细胞外铁检测：观察细胞外铁在骨髓中的分布情况。

　　1.4　统计学处理　采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用t检验;计数资料以百分率表示。以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　外周血细胞检测结果　(1)血红蛋白：正常26例(110～148g/L)，占8.23%;轻度贫血31例(90～108g/L)，占9.81%;中度贫血97例(60～89g/L)，占30.70%;重度贫血162例(29～58g/L)，占51.27%。(2)白细胞：正常47例[(4～10)×109　L-1]，占14.87%;降低264例[(0.14～3.95)×109　L-1]，占83.54%;增高5例[(14.66～62.86)×109　L-1]，占1.58%。(3)血小板：正常67例[(100～291)×109L-1]，占21.20%;降低239例[(1～98)×109　L-1]，占75.63%;增高10例[(316～453)×109　L-1]，占3.16%。(4)外周血涂片：77例可见原始细胞。

　　2.2　骨髓细胞形态学检测结果　有核细胞增生程度：极度活跃21例(6.65%)，明显活跃128例(40.51%)，增生活跃120例(37.97%)，降低47例(14.87%)。粒系病态造血：较多见部分粒细胞的颗粒增多、减少或缺失，其次是中晚期粒细胞的巨变，以巨杆状、巨分叶粒细胞多见，并可见双核粒细胞以及假性Pelger-Huet核型异常。红系病态造血：常见幼红细胞的巨变，以中晚期幼红细胞多见，其次是双核、多核、畸形核幼红细胞，另外，还可见核出芽、核碎裂、核间桥等现象。巨核细胞病态造血：表现为小巨核细胞、单圆核巨核细胞、多圆核巨核细胞和巨大多分叶核巨核细胞较常见。

　　2.3　细胞化学染色结果　细胞内铁：34%～92%，有14例环形铁粒幼细胞大于15%。

　　2.4　流式细胞仪检测结果　在MDS各亚型中CD34阳性细胞与骨髓形态学原始细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

　　2.5　两种检测方法符合率比较结果　以骨髓形态学检测结果为标准，CD34抗原检测结果与其相同者为符合，316例患者中，CD34抗原检测有244例与骨髓形态学检测结果符合，总符合率77.21%。

　　3　讨论

　　MDS是造血干细胞克隆性疾病，由于血细胞生成有质和量的改变，使疾病不断演化进展，有的最终转化为AML。流式细胞术免疫表型检测应用于MDS患者，根据CD34阳性细胞率，协助MDS患者进行分型与诊断。随着MDS患者病情的进展，低危型MDS向高危型MDS转化过程中，骨髓中原始细胞逐渐增多，CD34阳性细胞率进行性增高，CD34阳性细胞表达水平与疾病进展明显相关，与骨髓形态学原始细胞数呈正比。

　　本院在日常工作中对MDS患者检查骨髓形态学同时，利用流式细胞仪同步检测CD34抗原，检测结果与文献[8-9]报道相符。以骨髓形态学检测结果为标准，CD34检测结果与其相同者为符合，316例患者中，CD34检测结果有244例与骨髓形态学检测结果符合，符合率为77.21%。万岁桂等检测了88例MDS患者的标本，CD34检测结果与骨髓形态学检测结果符合率为80.7%，与本研究相似。

　　2种检测方法会也出现部分不一致的情况，分析其原因，流式细胞仪检测时：(1)骨髓液抽取过量、抽取的标本有凝块、细胞标记过程中单个核细胞的丢失都可造成标本稀释;(2)个别患者原始细胞CD34有不表达现象。因此，利用流式细胞仪检测CD34抗原，在各个环节中均要对仪器设备进行严格的质量控制，试验前将仪器调整到最佳检测状态，针对不同的细胞群体进行合理的设门分析，是获取准确结果的必要前提。各种检测手段都存在不同程度影响因素，多种检测方法会减少单一检测方法造成的误差。

　　骨髓形态学检测是MDS患者必不可少的重要检查手段之一[10-14]。免疫分型技术可以准确地区分原始细胞的来源及分化阶段，CD34是一种阶段性特异性抗原，CD34抗原阳性，提示原始细胞受阻于细胞增殖周期的较早分化阶段。CD34抗原检测在观察MDS疾病进展中起着重要作用，是MDS治疗和预后判断不可缺少的指标。